ĐT: 0948.27.99.88 - 0917.51.71.47 - 098.222.05.81

Thống Kê
Tổng truy cập
Trong tháng
Trong tuần
Trong ngày
Trực tuyến

NUÔI CẤY VI KHUẨN TRONG MÔI TRƯỜNG LỎNG

Thời gian đăng: 16-12-2016 10:10 | 233 lượt xemIn bản tin

NUÔI CẤY VI KHUẨN TRONG MÔI TRƯỜNG LỎNG

1.Cơ sở nền tảng

Các plasmid có thể mang 1 hoặc nhiều gen kháng kháng sinh, gen có liên quan đến một loại kháng sinh đặc hiệu mà vi khuẩn mang. Sự có mặt của gen kháng kháng sinh trong plasmid cho phép các nhà nghiên cứu dễ dàng phân lập vi khuẩn có chứa plasmid không mang gen kháng kháng sinh.

2.Quy trình:

2.1 Chuẩn bị môi trường LB (400ml)

  • 4g NaCl
  • 4g Tryptone
  • 2g Cao nấm men
  • Định mức nước đến thể tích 400ml

Sau khi pha xong, khử trùng và để nguội ở nhiệt độ phòng

Khi chuẩn bị nuôi cấy, chia môi trường LB lỏng vào các bình thủy tinh hoặc các ống nghiệm và bổ sung thêm kháng sinh tương ứng với nồng độ phù hợp.

Dùng 1 đầu tuýp pipet hoặc 1 cái tăm đã được khử trùng, nhặt 1 khuẩn lạc đơn từ đĩa LB thạch

Thả đầu tuýp hoặc cái tăm đó vào môi trường LB lỏng + kháng sinh và ngoáy.

Đậy nút nhôm hoặc nắp của bình nuôi

Nuôi vi khuẩn ở 370C và cho vào tủ ấm lắc, nuôi trong 12-18 tiếng.

 

>>> Xem ngay các loại Tủ ấm lắc tiên tiến nhất dành cho nuôi cấy vi sinh vật đã cung cấp trên thị trường Việt Nam

Chú ý: Một số plasmid hoặc chủng vi khuẩn phù hợp nuôi  ở 300C. Do vậy bạn nên nuôi trong thời gian dài hơn để đạt được mật độ sinh trưởng của chúng bởi vì chúng sẽ phát triển chậm hơn nhiều khi ở nhiệt độ thấp.

2.2 Sau khi nuôi, hãy kiểm tra sự sinh trưởng, được thể hiện bằng độ đục trong môi trường như trong hình a, hình b. 

sinh truong cua vi sinh vat trong tu nuoi lac

TIPS AND FAQ

1.Điểm khác biệt giữa plasmid bản sao cao và plasmid bản sao thấp là gì?

Số lượng bản sao có liên quan đến số bản sao của 1 plasmid riêng lẻ trong 1 tế bào vi khuẩn. Các plasmid lớn thường có lượng bản sao thấp (từ 1 đến 2 bản sao trong 1 tế bào) và chúng cần phát triển trong thời gian dài (khoảng 18- 30 giờ). Mặt khác, các plasmid nhỏ hơn lại có lượng bản sao nhiều hơn, từ 50 hoặc nhiều hơn trong mỗi tế bào. Plasmid có số bản sao lớn chỉ cần sinh trưởng trung bình từ 12-16h.

2.Tôi không thấy được sự sinh trưởng sau khi nuôi cấy tế bào vi khuẩn qua đêm. Điều gì đã xảy ra?

Hãy thử nuôi trong thời gian dài hơn. Một vài chủng vi khuẩn phát triển chậm hơn nhiều.  Tương tự như vậy, các vi khuẩn được nuôi ở nhiệt độ 300C thay vì ở 370C thì thông thường thời gian nuôi kéo dài hơn.

Kiểm tra lại chất kháng sinh mà bạn sử dụng để bổ sung vào môi trường LB đã phù hợp với plasmid của bạn chưa.

Nếu chủng vi khuẩn trên đĩa thạch LB của bạn không phải mới nuôi thì bạn nên cấy ria lại trên đĩa thạch LB mới trước khi nuôi trong môi trường LB lỏng.

Tăng trao đổi oxy có thể giúp tăng mật độ sinh trưởng.Thông thường nuôi lắc với tốc độ 150 – 250 vòng/phút. Tuy nhiên ta có thể tăng lên với tốc độ 300 vòng/phút. 

3BSCITECH

Theo (addgene.org)

Bình luận
Bản quyền thuộc về 3BSCITECH Co., Ltd